|
|
، جلد ۱۹، شماره ۵، صفحات ۴۲-۵۰
|
|
|
| عنوان فارسی |
همسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین نوترکیب با استفاده از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: ایمونوتوکسین یک توکسین هدفمند است که از اتصال دو بخش مجزا (بخش ایمنی و بخش توکسینی) با واسط شیمیایی یا پپتیدی اختصاصی تشکیل میشود. هدف اصلی تحقیق حاضر تولید پروتئین هیبریدی و نوترکیب مشتمل بر توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی است. مواد و روش ها: با توجه به ساختار اولین ایمنوتوکسین تجاری نوترکیب (اونتاک، پروتئین هیبریدی شامل توکسین دیفتری و اینترلوکین 2)، ژن به رمزدرآورنده توکسین دیفتری (DT) و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت (G-CSF) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و قالب پلاسمیدی pET-IDZ3 (پلاسمید pET21 حاوی ژن رمز کننده ایمونوتوکسین اونتاک) و pET-GCSF (پلاسمید pET23 حاوی ژن رمز کننده G-CSF) تکثیر یافت. سپس اتصال دو قطعه ژنی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و در طی روش Soeing PCR انجام شد. در ادامه، قطعه ژنی هیبریدی درون وکتور (+) pET21a منتقل گردید تا سازه ژنی pET-DT-GCSF به دست آید. ساخت این سازه ژنی از طریق توالی یابی، SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت. یافتهها: ژن به رمز درآورنده ایمونوتوکسین نوترکیب بین جایگاههای آنزیمی EcoRI و NdeI درون وکتور (+) pET21a به صورت صحیح کلون گردید و تولید سویه مولد ایمونوتوکسین نوترکیب DT-GCSF با استفاده از روشهای مرسوم مورد تأیید قرار گرفت. نتیجهگیری: سیتوکین هیبرید پروتئین، DT-GCSF، میتواند در راستای مقابله با سلولهای سرطانی و مهار آنها که در سطح سلولی آنها گیرندههای G-CSF زیاد بیان میشوند، مورد استفاده قرار گیرد. |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning and Expression of Recombinant Immunotoxin using Diphtheria Toxin and Granulocyte Colony Stimulating Factor (G-CSF) |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Immunotoxin (IT) is a directed toxin containing two distinct sections (immune and toxin parts) covalently bond using specific chemical or peptide linkers. The aim of this study is to produce a recombinant and hybrid protein containing diphtheria toxin (DT) and granulocyte colony stimulating factor (G-CSF). Materials and Methods: According to the structure of the first commercial recombinant immunotoxin (Ontak, hybrid protein containing DT fused interlukine2), gene encoding of DT and G-CSF was amplified using specific primers and plasmid template of pET-IDZ3 (pET21 harboring the gene encoding ontak immunotoxine) and pET-GCSF (pET23 harboring G-CSF), respectively. The DT-GCSF fusion protein produced using soeing PCR and specific primers. Finally, pET-DT-GCSF construction prepared using subcloning of DT-GCSF into pET21a(+) and confirmed by sequencing, SDS-PAGE and western blot technique. Results: Gene encoding of DT-GCSF inserted into NdeI/EcoRI site of pET21 and the construction of strain producing DT-GCSF recombinant immunotoxin was confirmed using customary methods. Conclusion: The cytokine fusion protein, DT-GCSF, could be used for the inhibition of G-CSF receptor bearing cancer cells. |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
فاطمه دنیاپور | Fatemeh Donyapoor
Department of Sciences and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran.
گروه علوم و فنآوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.
مهدی زین الدینی | Mehdi Zeinoddini
PhD in Biochemistry, Department of Sciences and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran.
دکترای تخصصی بیوشیمی، گروه علوم و فنآوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.
علی رضا سعیدی نیا | Ali Reza Saeedinia
PhD in Genetics, Department of Sciences and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran.
دکترای تخصصی ژنتیک، گروه علوم و فنآوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4124-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2048646.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|