، جلد ۱۹، شماره ۴، صفحات ۶۰-۶۸
عنوان فارسی کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن Tat-Nef ویروس HIV-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: یکی از پروتئین‌های مهم ویروس HIV-1 به نام Nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می‌تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (Tat، اسید آمینه‌های 48 تا 60) از ویروس HIV توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (CPP) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن Tat-Nef در باکتری اشرشیاکلی صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین توسط آنالیز وسترن بلات و تخلیص آن از طریق روش رنگ آمیزی معکوس انجام شد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا کلونینگ فیوژن Tat-Nef در وکتور بیانی pGEX6p2 صورت گرفت. سپس القای بیان پروتئین نوترکیب Tat-Nef در باکتری اشرشیا کلی سویه BL21 (DE3) توسط القا کننده IPTG انجام شد. تأیید بیان از طریق تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات با استفاده از آنتی‌بادی منوکلونال ضد Nef صورت گرفت. سپس، تخلیص پروتئین فیوژن توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. یافته‌ها: نتایج آنالیز PCR و هضم آنزیمی، وجود باند واضح حدود 726 جفت باز را روی ژل آگارز تأیید کرد که نشان‌گر کلونینگ صحیح فیوژن Tat-Nef در وکتور بیان پروکاریوتی pGEX6p2 بود. هم‌چنین، وجود باند پروتئینی حدود 54 کیلودالتون روی ژل SDS-PAGE نشان‌گر بیان پروتئین Tat-Nef بود که توسط آنتی‌بادی منوکلونال ضد Nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد.  نتیجه‌گیری: پروتئین فیوژن نوترکیبTat-Nef تخلیص شده به عنوان یک آنتی ژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل  عفونت ویروس HIV استفاده خواهد شد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ویروس HIV، Nef، Tat، پروتئین نوترکیب، باکتری اشرشیاکلی، واکسن
عنوان انگلیسی Cloning, Expression and Purification of the Recombinant HIV-1 Tat-Nef Fusion Protein in Prokaryotic Expression System
چکیده انگلیسی مقاله Background: Nef is one of the HIV-1 critical proteins, because it is essential for viral replication and AIDS disease progression and induction of immune response against it can partially inhibit viral infection. Moreover, a domain of the HIV-1 Trans-Activator of Transcription (Tat, 48-60 aa) could act as a cell penetrating peptide (CPP). In current study, cloning and expression of Tat-Nef fusion protein was performed in E. coli for the first time. The protein expression was confirmed by western blot analysis and was purified using reverse staining method. Materials and Methods: In this experimental study, primarily, cloning of Tat-Nef fusion gene was done in pGEX6p2 expression vector. Then, the expression of Tat-Nef recombinat protein in E.coli BL21 (DE3) strain was performed by using IPTG inducer. The protein expression was confirmed by SDS-PAGE and western blotting using anti-Nef monoclonal antibody. Then, the recombinant fusion protein was purified from gel using reverse staining method. Results: The results of PCR analysis and enzyme digestion showed a clear band of ~ 726 bp in agarose gel indicating the correct Tat-Nef fusion cloning in pGEX6p2 prokaryotic expression vector. In addition, a 54 kDa band of Tat-Nef on SDS-PAGE revealed Tat-Nef protein expression that western blot analysis using anti-Nef monoclonal antibody confirmed it. Conclusion: The purified Tat-Nef recombinant fusion protein will be used as an antigen for protein vaccine design against HIV infection.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله HIV virus, Nef, Tat, Recombinant protein, E. coli, Vaccine
نویسندگان مقاله سمیه کدخدایان | Somayeh Kadkhodayan
Department of Biology, Sciences and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran.
گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.

شیوا ایرانی | Shiva Irani
Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.

سید مهدی سادات | Seyed Mehdi Sadat
Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran.
بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.

فاطمه فتوحی | Fatemeh Fotouhi
Influenza Research Lab., Department of Virology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran.
آزمایشگاه تحقیقاتی آنفلوانزا، بخش ویروس شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.

اعظم بوالحسنی | Azam Bolhassani
Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran.
بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.

نشانی اینترنتی http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4144-1&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2048658.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده عمومی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی اصیل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات