|
|
، جلد ۱۵، شماره ۵، صفحات ۵۸-۶۵
|
|
|
| عنوان فارسی |
جداسازی و کلونینگ ژن نورآمینیداز ویروس آنفلوانزا A (H۱N۱ سویهNew Caledonia ) در وکتور بکمید به منظور ساخت باکیولوویروس نوترکیب |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: در سالهای اخیر ویروس آنفلوانزا باعث عفونتهای متوسط تا شدید با میزان پراکندگی وسیع در سرتاسر دنیا شده است. بر این اساس، واکسن آنفلوانزایی که تنها یک دوز آن محافظت ایجاد نماید هنوز در دسترس نیست. بنابراین، تهیه یک واکسن عمومی و فراگیر بر اساس ذرات شبه ویروسی غیرتکثیری ایدهال میباشد. در تحقیق حاضر یکی از سازههای مولکولی برای ساخت این ذرات مد نظر قرار گرفته است. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، رده سلولی MDCK برای تکثیر ویروس آنفلوانزای انسانی تیپ A/New Caledonia H1N1 استفاده شد. سپس کل RNA سلول، استخراج شده و با استفاده از پرایمر random hexamer به عنوان پرایمر عمومی cDNA ساخته شد. قطعه (1413 bp)NA با روش PCR تکثیر داده شد و در وکتور pBluescript SK کلون شد. سپس قطعه نورآمینیداز در پلاسمید pFastBac11 از طریق محلهای برش آنزیمی SalI و XhoI سابکلون گردیده و صحت آن با توالییابی دو طرفه مورد تایید قرار گرفت. وکتور pFastBac1NA به میزبان E.coli DH10Bac که حاوی بکمید و پلاسمید کمکی بود منتقل شد تا بکمید نوترکیب نورآمینیداز ساخته شود. یافتهها: بکمید نوترکیب نورآمینیداز با روش نوترکیبی هومولوگ بین pFastBac1NA و بکمید به وجود آمد. این محصول با استفاده از PCR و پرایمرهای اختصاصی نورآمینیداز و عمومی M13 تایید گردید. نتیجهگیری: از بکمید نوترکیب ساخته شده در این مطالعه به همراه بکمیدهای نوترکیب، حاوی سایر ژنهای ساختمانی ویروس، میتوان برای ساخت ذرات شبه ویروسی آنفلوانزا استفاده نمود و یا پروتئین حاصل از بیان این سازه را در سلولهای حشرات خالص نموده و در تحقیقات واکسن شناسی استفاده نمود. |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
ویروس آنفلوانزا، نورآمینیداز، بکمید نوترکیب، ذرات شبه ویروسی |
|
| عنوان انگلیسی |
Construction of a recombinant bacmid DNA in order to express Neuraminidase gene of influenza virus H1N1 |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: In recent years Influenza viruses have caused widely spread moderate to severe infection in all around the world and there is no Influenza vaccine which can protect people only with one dose injection till now. Therefore , producing a universal vaccine based on virus like particle (VLP) could be ideal. In this study one of the molecular structures was considered for VLP based Influenza vaccine. Materials and Methods: In this experimental study, the human influenza virus (A /New Caledonia 20/1999/ (H1N1)) was propagated in MDCK cell culture. Viral RNA was extracted using RNX-plus solution. Complementary DNA synthesis was carried out using uni-12 primer and random hexamer as specific and general primers, respectively. Neuraminidase open reading frame (1413-bp) was amplified by PCR and cloned into pBlue-script SK. Neuraminidase coding frame sub cloned into pFastBac11 plasmid through SalI/XhoI sites. After verification of cloned Neuraminidase by restriction analysis, it was subjected to automated sequencing bi-directionally. The recombinant pFastBac Neuraminidase vector was transformed to E.coli DH10Bac cells which harbor bacmid DNA and helper plasmid to create Neuraminidase recombinant bacmid. Results: Neuraminidase recombinant bacmid was created by homologous recombination between pFastBacNA and bacmid and was verified by PCR using Neuraminidase specific and M13 universal primers. Conclusion: Recombinant baculovirus expressing Neuraminidase gene can be also used with other individual recombinant baculoviruses expressing HA and M1 genes in production of influenza VLPs or proteins resulting from this structure could be purified in specific insects for vaccine research studies. |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
سارا نجفی | Sarah Najafi
islamic azad university
دانشگاه آزاد
فریدا بهزادیان | Farida Behzadian
research center for biotechnology
پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، اتوبان شهید بابایی، خیابان شهید شعبانلو، لویزان، صندوق پستی 1774-15875
فاطمه فتوحی | Fatemeh Fotuhi
Pasteur Institute of Iran
انستیتو پاستور
جلیل فلاح مهرآبادی | Jalil Fallah Mehrabadi
Islamic Azad University
دانشگاه آزاد اسلامی واحد مینودشت
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1413-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2049121.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|