|
|
، جلد ۱۴، شماره ۴، صفحات ۶۹-۷۸
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ اینترفرون لامبدا-۱ (اینترکولین-۲۹) انسانی از سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت و بیان آن در سلول هایHEK۲۹۳T یوکاریوتی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: اینترفرونهای نوع سه دارای سه لیگاند می باشند: IFN-λ1(IL-29)، IFN-λ2(IL-28A) و IFN-λ3(IL-28B) که این سه لیگاند، گیرنده هترودایمر منحصر به فرد یکسانی را بکار می برند که از زنجیرههای CRF2-12 (IFN-λ-R1/IL-28Ra) و CRF2-4(IL10-R-b) تشکیل یافته است. اینترفرونهای لامبدا چندین خصوصیت از جمله فعالیتهای ضد ویروسی، ضد تکثیری، ایمونومدولاتوری و فعالیت ضد توموری در in vivo را نشان می دهند. هدف این مطالعه کلون کردن ژن IFN-λ1 بدست آمده از سلولهای دندریتیک و بررسی تولید پروتئین آن در حامل بیانی یوکاریوتی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، RNA تام از سلولهای دندریتیک مشتق شده از مونوسیت تحریک شده با صد ng/ml از LPSاستخراج گردید. cDNA از RNA کل سنتز شد. سپس cDNA مربوط به IFN-λ1 با پرایمرهای اختصاصی توسط PCR تکثیر و در داخل حامل PTZ57R/Tدر اشرشیاکلی سویه DH5α کلون شد. سپس با استفاده از اندونوکلئازهای محدودالاثر KpnI و BamHI به داخل پلاسمید pcDNA3.1+ ساب کلون شد. بعد از انتقال به HEK293T، بیان پروتئین توسط روش ELISA ساندویچی تایید شد. نتایج: توالی DNA وارد شده مشابه با توالی کد کننده IFN-λ1 موجود در Gene Bank بود. ژن IFN-λ1 در سلول های ترانسفکت شده رونویسی و بیان آن در سلول های HEk293T توسط الیزای ساندویچی تأئید گردید. نتیجه گیری: کلونینگ و بیان موفق IFN-λ1 میتواند نخستین گام برای تولید و تحقیقات بیشتر درباره فعالیتهای این سایتوکاین و فراهم آوردن زمینه های تحقیقاتی برای کسب روشهای درمانی جدید برای سرطان، عفونت های ویروسی، بیماریهای خود ایمنی و آلرژی و طراحی واکسنهای مؤثرتر بکار رود |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
اینترفرون لامبدا 1، کلونینگ، بیان، PCR |
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning of human IFN-λ1 (IL-29) from monocyte derived DCs and its expression in HEK 293 T |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Type III Interferon (IFN) is a novel member of the interferon family, which contains three ligands: IFN-λ1 (IL-29), IFN-λ2 (IL-28A) and IFN-λ3 (IL-28B).These three ligands use the same unique heterodimeric receptor composed of CRF2-12 (IFN-λ-R1/IL-28Ra) and CRF2-4 (IL10-R-b) chains which are completely different from type I & type II IFN receptors. IFNsλ exhibit several features such as antiviral activity, antiproliferative activity, immunomodulatory activity and in vivo antitumour activity. In this work we aimed to clone the ogene of IFN-λ1 obtained from dendritic cells and assess protein production in eukaryotic expression vector. Materials and methods: in thid experimental study, total RNA was extracted from monocyte derived dendritic cells stimulated with 100 ng/ml of LPS. cDNA was synthesized from total RNA .Then cDNA of IFN-λ1 was amplified by PCR with specific primers and cloned into the PTZ57R/Tvector in the E.coli (DH5α). This was subsequently subcloned into plasmid pcDNA3.1+, using KpnI and BamHI restriction endonucleases. After tranfection into HEK293 T, expression of protein was tested by sandwich-ELISA method. Results: The DNA sequence of the insert was identical to the published sequences encoding IFN-λ1 in GeneBank. It was demonstrated that IFN-λ1 gene was markedly transcribed in transfected cells. Expression of IFN-λ1 in HEK293 T cells was confirmed by sandwich ELISA. Conclusion: Successful cloning and expression IFN-λ1 can be the first step for more production and further investigation about other activities of this cytokine and provides grounds for research on obtaining new therapeutic approaches for cancer, viral, autoimmune and allergic disease and designing more effective vaccines. |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
Interferon Lambda 1, Cloning, Expression, PCR |
|
| نویسندگان مقاله |
پریسا امیرکلوانق | Parisa Amir Kalvangh
معصومه ابتکار | Massoumeh Ebtekar
کیهان آزاد منش | Keyhan Azadmanesh
کریستینه هارطونیان | Christine Hartoonian
مهدی مهدوی | Mehdi Mahdavi
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-841-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2049223.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|