|
|
، جلد ۱۳، شماره ۳، صفحات ۲۷۹-۲۸۹
|
|
|
| عنوان فارسی |
خالص سازی آلفا توکسین سویه بومی NH۲ کلستریدیوم سپتیکوم و تولید آنتی بادی آن |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه مطالعه: کلستریدیوم سپتیکوم عامل ایجاد بیماری های حاد متعددی در انسان و حیوانات است. آلفاتوکسین مهمترین فاکتور بیماریزایی کلستریدیوم سپتیکوم است و فعالیتهای همولیتیکی، نکروتیکی و کشندگی دارد.
هدف: درمطالعه حاضر، خالص سازی آلفاتوکسین سویه بومی کلستریدیوم سپتیکوم NH2 و تهیه آنتی بادی علیه آن انجام شده که می تواند در تهیه کیت های تشخیصی ، آزمون توانایی واکسن و موارد مرتبط مورد استفاده قرار گیرد.
روش کار: سویه بومی کلستریدیوم سپتیکوم NH2 در محیط جگر کشت داده شد. آلفاتوکسین مترشحه در محیط کشت، طی سه مرحله خالص سازی شد: رسوب دادن با آمونیوم سولفات 25 و 60 % اشباع، کروماتوگرافی تغییر یونی با ستون DEAE-Sephadex و ژل فیلتراسیون بر روی SephadexG-50. در تمامی مراحل میزان آلفا توکسین مورد اندازه گیری قرار گرفت و روش خالص سازی با SDS-PAGE ارزیابی شد. متعاقب ایمن سازی خرگوش با آلفاتوکسین و تهیه سرم از حیوان، ایمونوگلوبین با یک فرایند سه مرحله ای خالص شد: آمونیوم سولفات، کروماتوگرافی تغییر یونی و ژل فیلتراسیون. عملیات مسیر خالص سازی آنتی بادی به وسیله آزمون های الکتروفورز، ایمونودیفیوژن دوطرفه و شعاعی یکطرفه(SRID) ، وسترن بلات و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت.
نتایج: مراحل خالص سازی که با آمونیوم سولفات 25% آغاز و با 60% ادامه یافت موجب حذف بسیاری از پروتئین ها گردید. نتایج کروماتوگرافی تعویض یونی با غلظت های مختلف نمک نشان داد که غلظت 0.4 مولار نمک می تواند از همه بیشتر آلفاتوکسین را از ستون DEAE جدا نماید. آلفاتوکسین در مرحله اول، در محیط کشت باکتری فعالیت مخصوص U/mg 394 را داشت و در نهایت، پس از انجام مراحل خالص سازی فعالیت مخصوصش به U/mg 13666 رسید. روند خالص سازی توانست توکسین را 35 برابر خالص کرده و 47 % توکسین اولیه را تخلیص و بازیابی نماید. نتایج الکتروفورز روی ژل SDS-PAGE حاکی از خلوص حدودی آلفاتوکسین بود. نتایج ایمونودیفیوژن دوطرفه و شعاعی یکطرفه وجود آنتی بادی مربوطه را تایید نمود. در فرایند وسترن بلات، دو زنجیره سبک و سنگین ایمونوگلوبین توسط مرکاپتواتانول از هم جدا شده و در الکتروفورز فقط با پروتئین 48 کیلودالتونی بر روی غشاء نیتروسلولزی واکنش داد.
نتیجه‌گیری نهایی: نتایج این تحقیق منجر به دستیابی به روش خالص سازی آلفاتوکسین کلستریدیوم سپتیکوم و آنتی بادی علیه آن سریعتر و اقتصادی تر از روش‌های سایر محققین گردید. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Alpha Toxin Purification and Antibody Production Against Local Strain of Clostridium septicum NH2 |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
BACKGROUND: Clostridium septicum has played a significant role as a causative agent of many acute fetal diseases in man and animals. Alpha- toxin is the main factor in the pathogenesis of C. septicum with hemolytic, necrotic and lethal activities.
OBJECTIVES: The study was designed to evaluate alpha-toxin purification and antibody production rate against a local strain of C. septicum NH2 which could be applied in diagnosing kits, potency test of the vaccines, and other related applications.
METHODS: Local strain of C. septicum NH2 was cultured in liver broth. Alpha-toxin in supernatant purified by three steps: the first step was done by 25% and 60% of ammoniums sulfate precipitation and continued by DEAE-Sephadex ion exchange chromatography, and finally finished in gel filtration on Sephadex G-50. Alpha-toxin was assayed in all steps and purification procedures were analyzed by SDS-PAGE. After immunization of rabbits with alpha- toxin and serum collection, immunoglobulin was separated by three purifying steps: ammoniums sulfate, ion exchange chromatography, and gel filtration. Serum purification process was evaluated by electrophoresis, double immunodiffusion (DID), single radial immunodiffusion (SRID), western blot, and SDS-PAGE.
RESUTLS: SDS-PAGE results showed the alpha-toxin and anti-alpha-toxin were purified partially. Double immunodiffusion and single radial immunodiffusion methods detected the specific antibody. Heavy and light chains of anti-alpha-toxin separated by 2ME in electrophoresis reacted with 48 kDa alpha-toxin during the western blot without any reaction to other proteins in nitrocellulose paper.
CONCLUSIONS: The present study showed a modified protocol for C. septicum alpha-toxin and anti-alpha-toxin production. The purification method is more economical and faster than previously reported procedures, and anti-alpha-toxin production is an advantage in detection of C. septicum infection |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
alpha-toxin,anti-alpha-toxin,Clostridium septicum,polyclonal antibody,purification |
|
| نویسندگان مقاله |
Mohsen Najafi Najafi |
Razi Vaccine and Serum Research Institute. Mashhad Branch, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Mashhad, Iran
Mohammad Hemmaty |
Razi Vaccine and Serum Research Institute. Mashhad Branch, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Mashhad, Iran
Khadijeh Moridi |
Department of Microbiology and Virology, Faculty of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran 3 Antimicrobial Resistance Research Center, Buali Research Institute, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran 4 Vice Chancellory for Health. Mashhad University of Medical Sciences. Mashhad. Iran 5 Student Research Committee, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran
|
|
| نشانی اینترنتی |
https://ijvm.ut.ac.ir/article_72835_cc1f26f82228f49715262718a69282bf.pdf |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
en |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
|
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|