مجله دانشگاه علوم پزشکی قم، جلد ۱۰، شماره ۶، صفحات ۱۳-۲۳
عنوان فارسی زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A)
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT)، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می‌باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) بررسی گردید روش بررسی: در ابتدا ژن ناحیه BoNT/A از GenBank با شماره دسترسی CP000727.1 تهیه و براساس ترجیح کدونی E. coli، بهینه‌سازی کدون انجام شد. سپس در پلاسمید pET28a، سنتز و بعد از آن در پلاسمید بیانی pGEX-4T-1، زیرهمسانه‌سازی شد. زیرهمسانه‌سازی با استفاده از روش PCR با آنزیم Pfu DNA polymerase و سپس برش دوگانه با آنزیم‌های XmaI و XhoI انجام گرفت. از سویه E. coli BL21 به‌عنوان میزبان برای بیان استفاده شد. مارکر انتخابی برای pGEX-4T-1، آمپی‌سیلین بود. یافته‌ها: روش‌های PCR و برش محدودکننده با آنزیم‌های ذکرشده، زیرهمسانه‌سازی را تأیید کردند. بررسی بیان با استفاده از روش‌های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ (با استفاده از آنتی‌بادی اسبی ضدBoNT/A)، سپس کروماتوگرافی تمایلی گلوتاتیون انجام گرفت. با اینکه زیرهمسانه‌سازی با موفقیت انجام شد، ولی با به‌کارگرفتن روش‌های ذکرشده، هیچ‌گونه بیان پروتئین مشاهده نشد. نتیجه‌گیری: براساس نتایج این مطالعه، به‌نظر می‌رسد باید میزبان‌های دیگری مانند میزبان‌های یوکاریوتی برای بیان نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A مورد استفاده قرار گیرند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Subcloning and Assessment of the Expression of Synthetic Gene of Botulinum Neurotoxin Type A Binding Domain (BD/A)
چکیده انگلیسی مقاله Background and Objectives: Botulism syndrome is caused by Clostridium botulinum neurotoxin. This neurotoxin has seven serotypes ranging from A to G. The best way to prevent botulism syndrome caused by Botulinum neurotoxin (BoNT), is using recombinant vaccine made from its binding domain (due to having sufficient epitopes to stimulate immune system). In this study, the binding domain of BoNT serotype A (BoNT/A), was investigated. Methods: Initially, BoNT/A gene with accession number CP000727.1, was obtained from GenBank and was codon optimized according to the codon usage of E. coli. Then, the sequence was synthesized in pET28a plasmid and then subcloned in pGEX-4T-1 expression plasmid. The subcloning was done using PCR with Pfu DNA polymerase and then double digestion with XmaI and XhoI restriction enzymes. E. coli BL21 strain was used as the expression host. The selected marker for pGEX-4T-1 was ampicillin. Results: PCR and restriction digestion with the mentioned enzymes confirmed the subcloning process. The assessment of gene expression was performed by SDS-PAGE and western blotting (using horse anti-BoNT/A (and then glutathione affinity chromatography was performed. Although, the subcloning was performed successfully, no protein expression was observed. Conclusion: According to the findings of this study, it seems that other hosts, such as eukaryotic hosts should be used for recombinant expression of BoNT/A binding domain.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مجید زواری | majid zavvary
1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

فیروز ابراهیمی | firouz ebrahimi
1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

شهرام نظریان | shahram nazarian
1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

عباس حاجی زاده | abbas hajizadeh
1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

یوسف تاروردی زاده | yousof tarverdizadeh
1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

نشانی اینترنتی http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-542&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات