|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی قم، جلد ۱۰، شماره ۵، صفحات ۲۹-۳۷
|
|
|
| عنوان فارسی |
زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به‌منظور کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: ابتدا توالی ژن ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ Bاز سایت NCBI با کد دسترسی EF028399.1 گرفته شد. بعد از بهینه‌سازی کدون، ژن مورد نظر به‌صورت صناعی در داخل وکتور pUC18 تهیه گردید. سپس این ژن در وکتور بیانی pET32a(+) که دارای مارکر انتخابی آمپی‌سیلین می‌باشد، زیرهمسانه‌سازی شد. جهت تأیید صحت زیرهمسانه‌سازی؛ از PCR، برش آنزیمی و تعیین توالی و برای بررسی بیان از سوش E. coli BL21(DE3) استفاده گردید. صحت بیان پروتئین با الکتروفورز (تحت شرایط مختلف و روش وسترن بلات) مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: واکنش‌های PCR، برش آنزیمی را براساس سایت‌های برشی در وکتور و در نهایت، تعیین توالی تأیید کرد که ژن مورد نظر به‌طور مناسب در وکتور pET32a(+)، همسانه‌سازی شد. بررسی بیان با استفاده از SDS- PAGE و متعاقب آن انجام وسترن بلاتینگ نشان داد پروتئین مورد نظر در سویه بیانی مذکور بیان نمی‌شود. نتیجه‌گیری: اگرچه ژن مورد نظر در داخل وکتورpET32a(+)، به‌طور مناسب زیرهمسانه‌سازی گردید، با این حال هیچ بیان قابل‌مشاهده‌ای از ژن مورد نظر دیده نشد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
کلستریدیوم بوتولینوم، بررسی بیان، واکسن نوترکیب. |
|
| عنوان انگلیسی |
Subcloning and Assessment of the Expression of Synthetic Botulinum Neurotoxin Type B Binding Domain (BD/B) |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background and Objectives: Botulism syndrome is caused by Clostridium botulinum neurotoxin. This neurotoxin has 7 serotypes, from A to G. The best way to prevent botulism syndrome caused by BoNT/B is immunization with recombinant binding domains of BoNT/B (due to containing sufficient epitopes to stimulate the immune system). In this study, the expression of the BoNT/B binding domain as a candidate vaccine, was investigated. Methods: At first, the sequence of the BoNT/B binding domain gene was obtained from NCBI website with accession number of EF028399.1. After codon optimization, the gene was synthesized in pUC18 vector. Then, the gene was subcloned in pET32a(+) expression vector that carries an ampicillin selection marker. PCR, enzymatic digestion, and sequencing were used to confirm subcloning accuracy, and E. coli BL21(DE3) was used for the expression analysis. The accuracy of protein expression was evaluated by electrophoresis and western blotting. Results: PCR reaction, enzymatic digestion, and sequencing confirmed that the gene of interest has been subcloned appropriately in the vector. The expression analysis by SDS-PAGE and subsequently western blotting, showed that the protein of interest is not expressed in the mentioned expression strain. Conclusion: Although the gene was successfully subcloned in pET32a(+) vector, no significant expression of the gene was observed. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
مجید برادران | majid baradaran
biology research center, faculty of basic sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)
فیروز ابراهیمی | firouz ebrahimi
biology research center, faculty of basic sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)
شهرام نظریان | shahram nazarian
biology research center, faculty of basic sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)
عباس حاجی زاده | abbas hajizade
biology research center, faculty of basic sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)
یوسف تاروردی زاده | yousof tarverdizadeh
biology research center, faculty of basic sciences, imam hossein university, tehran, iran.
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-532&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
روانشناسی |
| نوع مقاله منتشر شده |
مقاله پژوهشی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|