مجله دانشگاه علوم پزشکی قم، جلد ۷، شماره ۴، صفحات ۸۱-۸۸
عنوان فارسی طراحی واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز بهبودیافته جهت تشخیص مولکولی باکتری استرپتوکوکوس نیومونیا
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: باکتری استرپتوکوکوس نیومونیا عامل مننژیت باکتریایی و یک عامل مهم مرگ و میر در کودکان و افراد سالخورده است. کنترل این بیماری نیز وابسته به تشخیص سریع باکتری می‌باشد. روش‌های تشخیص این باکتری شامل رنگ‌آمیزی گرم، کشت و تست‌های سرولوژیکی است. این روش‌ها وقت‌گیر و در اثر مصرف آنتی‌بیوتیک منجر به نتایج منفی کاذب می‌شوند. در حال حاضر، روش‌های مولکولی مانند PCR به‌صورت روزانه برای تشخیص عوامل عفونی استفاده می‌شوند. این مطالعه با هدف طراحی یک واکنش بهبودیافته PCR جهت تشخیص باکتری استرپتوکوکوس نیومونیا صورت گرفت. روش بررسی: پرایمرهای تشخیصی اختصاصی براساس ژن ply باکتری طراحی گردید. پس از تکثیر ژن هدف در DNA ژنومی باکتری، محصول PCR در پلاسمید pTZ57R/T کلون شد و پلاسمید تأییدشده pTZ-ply به‌عنوان کنترل مثبت در آزمایشهای بعدی مورد استفاده قرار گرفت. جهت تعیین حساسیت واکنش، رقت‌های متوالی 10 تایی از پلاسمید pTZ-ply تهیه و بر روی آنها واکنش PCR انجام گرفت. برای تعیین ویژگی واکنش از ژنوم تعدادی باکتری‌ مرتبط یا غیرمرتبط در واکنش PCRاستفاده شد. یافته‌ها: نتایج PCR مطابق انتظار، قطعه 727 جفت باز را نشان داد. هیچ‌گونه تکثیری در PCR بر روی ژنوم باکتری‌های کنترل منفی دیده نشد. این نتایج نشان‌دهنده ویژگی بالای واکنش PCR بود. پایین‌ترین حد تشخیص این آزمون در تشخیص ژن ply، 250 کپی از ژن در یک واکنش 25 میکرولیتری بود. نتیجه‌گیری: حساسیت، ویژگی و سرعت بالای آزمون طراحی‌شده، آن را به‌عنوان یک تست مناسب برای استفاده در آزمایشگاه‌های کلینیکی مطرح می‌کند. همچنین ارزیابی بیشتر این آزمون با استفاده از نمونه‌های کلینیکی یا مواد آلوده‌شده مصنوعی، کاربرد این روش را در مجموعه‌‌ای کلینیکی تأیید خواهد کرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Design of an Improved Polymerase Chain Reaction (PCR) Assay for Molecular Detection of Streptococcus pneumonia
چکیده انگلیسی مقاله Background and Objectives: Streptococcus pneumoniae accounts for bacterial meningitis and is an important cause of morbidity among children and elderly. Control of this disease depends on rapid detection of the causative bacteria. The methods for detection of Streptococcus pneumoniae are gram staining, culture, and serological tests. These tests are time consuming and are limited by antimicrobial agents leading to false negative results. Currently, molecular methods such as PCR are used routinely for detection of infectious organisms. This study was performed with the aim of designing an improved PCR assay for the detection of Streptococcus pneumoniae. Methods: The specific diagnostic primers were designed based on ply gene of the bacterium. After amplifying the target gene on the genomic DNA, the PCR product was cloned in pTZ57R/T plasmid and the confirmed pTZ-ply plasmid was used as positive control in next experiments. Sensitivity of the assay was determined by performing the PCR on 10-fold serial dilutions of pTZ-ply. Specificity of the assay was determined using the genomic DNA of other related or unrelated bacterial species. Results: The PCR, as expected, generated a 727bp amplicon. No PCR amplification was observed on the genome of negative controls. These findings indicate high specificity of the PCR. The lowest limit of detection of the assay in the detection of the ply gene was 250 copies in a 25µl reaction. Conclusion: The high sensitivity, specificity, and rapidity of the designed assay suggested the assay as an appropriate test for use in clinical laboratories. The further evaluation of the assay using clinical samples or artificially contaminated materials will confirm the application of this assay in clinical setti
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله فهیمه آقامیری | fahimeh aghamiri
islamic azad university, qom branch
آزاد اسلامی، واحد قم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

محمد سلیمانی | mohammad soleimani
islamic azad university, qom branch
آزاد اسلامی، واحد قم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

امیرحسین محسنی | amir hossein mohseni
islamic azad university, qom branch
آزاد اسلامی، واحد قم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

کیوان مجیدزاده | keivan majidzade
aja university of medical sciences
دانشگاه علوم پزشکی آجا ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی ارتش (Artesh university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-293&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات