|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی قم، جلد ۱۲، شماره ۵، صفحات ۴۴-۵۲
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ، بیان و خالص‌سازی زیرواحدهای α، βa و βb پروتئین اینهیبین انسانی در اشرشیاکلی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: اینهیبین، یک هورمون گلیکوپروتئینی است که به‌طور معمول در گردش خون وجود دارد، اما در برخی بیماری‌ها میزان آن افزایش می‌یابد و اندازه‌گیری آن به روش سرولوژی با استفاده از آنتی‌بادی‌های مونوکلونال علیه آن نیز می‌تواند به تشخیص برخی بیماری‌های ژنتیکی کمک کند. این مطالعه با هدف کلونینگ، بیان و خالص‌سازی زیرواحدهای α، βa و βb پروتئین اینهیبین انسانی در اشرشیاکلی انجام شد. روش بررسی: برای ژن هرکدام از زیرواحدهای اینهیبین، یک جفت پرایمر طراحی گردید، سپس توالی ژنی هریک از زیرواحدهای اینهیبین به روش PCR(واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) از DNA (دزوکسی ریبونوکلئوتید اسید) ژنومی انسان به دست آمد و پس از هضم آنزیمی در وکتور pET22b کلون شد. وکتور نوترکیب مربوط به هریک از زیرواحد‌ها، به میزبان اشرشیاکلی (سویه BL21) انتقال یافت. سلول‌های ترانسفورم‌شده در محیط کشت LB حاوی آمپی‌سیلین کشت داده شدند، سپس کلنی‌های مثبت جهت تولید انبوه پروتئین نوترکیب جداسازی گردید. پس از کشت انبوه و القای سویه‌های ترانسفورم‌شده با IPTG (ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوپیرانوزید)، پروتئین نوترکیب تولید‌شده به کمک روش کروماتوگرافی میل ترکیبی ستون نیکل جداسازی شد. یافته‌ها: ژن زیرواحدهای هورمون اینهیبین به‌درستی در وکتور pET22b کلون و بیان آن در اشرشیاکلی، به‌طور قابل‌ملاحظه‌ای بالا بود. نتایج حاصل از بیان هورمون اینهیبین نشان داد درصورت عدم انجام بهینه‌سازی کدونی، بیان اینهیبین در میزبان پروکاریوت به‌طور قابل‌توجهی بالا می‌رود. زیرواحدهای پروتئینی α، βa و βb هورمون اینهیبین به ترتیب با اوزان مولکولی 7/13، 12 و 12 کیلودالتون خالص‌سازی شدند. نتیجه‌گیری: زیرواحدهای پروتئینی هورمون اینهیبین به‌دلیل اندازه کوچک و توالی کوتاه ژن، همچنین تغییرات بعد از ترجمه‌ای اندک، در میزبان پروکاریوتی قابل‌بیان هستند. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
اینهیبین‌ها، پروتئین‌های نوترکیب، اشرشیاکلی. |
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning, Expression, and Purification of α, βa, and βb Subunits of Human Inhibin Protein in Escherichia coli |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background and Objectives: Inhibin is a glycoprotein hormone commonly found in the circulation, but its level increases in some diseases, and its measurement by serological method using anti-inhibin monoclonal antibodies, can help in diagnosis of some genetic diseases. This study was performed with the objective of cloning, expression, and purification of α, βa, and βb subunits of human inhibin protein in Escherichia coli. Methods: For each Inhibin subunit gene. a primer pair was designed. Then, the gene sequence of each of the subunits, was obtained from human genomic DNA using polymerase chain reaction (PCR) method, and then was cloned into pET22b vector after enzymatic digestion. Recombinant vector associated with each subunit, was transferred to the host cell E. coli (strain BL21). The transformed cells were cultured in LB culture medium containing ampicillin, and positive colonies were isolated for mass production of recombinant protein. After mass culture and induction of transformed strains by isopropyl β-D-thiogalactopyranoside (IPTG), the produced recombinant protein, was isolated using nickel column chromatography. Results: The inhibin hormone subunit genes, was correctly cloned in pET22b vector and its expression in E. coli, was considerably high. The results of the expression of inhibin hormone also showed that in the absence of codon optimization, the inhibin expression in the prokaryote host increases significantly. The protein subunits α, βa, and βb of inhibin hormone, were purified, respectively, with molecular weights of 13.7, 12, and 12 kDa. Conclusion: protein subunits of inhibin hormone, can be expressed in the prokaryotic host due to their small size, short gene sequence, and minor post-transcriptional modifications. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
Inhibins, Recombinant proteins, Escherichia coli. |
|
| نویسندگان مقاله |
محمد عطائی | mohammad ataei
Faculty of Advanced Technologies in Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
دانشکده فناوری‌های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.
الهه متوسلی | Elahe motevaseli
Department of Molecular Medicine, Faculty of Advanced Technologies in Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
گروه پزشکی مولکولی، دانشکده فناوری‌های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.
محمدحسین مدرسی | Mohammad Hosse Modarressi
Department of Molecular Medicine, Faculty of Advanced Technologies in Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
گروه پزشکی مولکولی، دانشکده فناوری‌های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.
اسماعیل صدرالدینی | Esmaeil Sadroddiny
Faculty of Advanced Technologies in Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
دانشکده فناوری‌های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.
غلامرضا طاوسی‌دانا | Gholamreza Tavoosidana
Department of Molecular Medicine, Faculty of Advanced Technologies in Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
گروه پزشکی مولکولی، دانشکده فناوری‌های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1025-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/70/article-70-739466.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
سلولی و مولکولی |
| نوع مقاله منتشر شده |
مقاله پژوهشی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|