|
|
Iranian Journal of Veterinary Medicine، جلد ۱۰، شماره ۳، صفحات ۱۵۷-۱۶۳
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و بیان ژن میکرونم ۵ ایمریا نکاتریکس در اشرشیاکلی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه مطالعه: آیمریا نکاتریکس عامل کوکسیدیوز حداکثر تأثیر اقتصادی را بر روی تولید پرندگان دارد. به نظر می‌رسد پروتئین‌های میکرونم نقش مهمی در حرکت انگل و تهاجم به سلول‌های میزبان دارد. هدف: جداسازی و خالص‌سازی اووسیست آیمریا نکاتریکس از استان خوزستان-ایران بود. یک cDNA کد کننده پروتئین میکرونم 5 (EnMIC5) کلون و پس از بیان کردن این پروتئین نوترکیب، خاصیت ایمنی‌زایی آن توسط وسترن بلوتینگ مورد آزمایش قرار گرفت. روش کار: یک جفت پرایمر بر اساس توالی نوکلئوتیدی موجود برای ژن میکرونم 5 آیمریا نکاتریکس سویه LZ طراحی و به وسیله آن توالی بخشی از cDNA کد کننده این پروتئین به میزان bp 758 با استفاده از روش Semi- Nested RT-PCR تکثیر گردید سپس قطعه بدست آمده به درون وکتور pMAL-c2x حاوی پروتئین باند شونده به مالتوز کلون و در باکتری E . coli سویه TG1 بیان گردید. قطعه تکثیر شده، یک open reading frame 252 اسیدآمینه ای داشت که به میزان قابل توجهی حاوی مناطق حفاظت شده شامل پری کالکرئین پلاسمایی چسبنده و هفت جزء آبدوست بود. نتایج: در SDS-PAGE پروتئین الحاقی با وزن مولکولی در حدود 70 کیلو دالتون پس از القاء توسط IPTG بیان شد. آزمایش وسترن بلات نشان داد که پروتئین نوترکیب با سرم بدست آمده از جوجه‌های آلوده به آیمریا نکاتریکس واکنش می‌دهد. نتیجه گیری نهایی: یافته‌ها نشان داد پروتئین بدست آمده قدرت ایمنی‌زایی نسبتاً خوبی داشته و می‌تواند در آینده مورد مطالعه بیشتری قرار گیرد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning and expression of Eimeria necatrix microneme5 gene in Escherichia coli |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Coccidiosis caused by Eimeria necatrix has the most economic impact onpoultry production. Micronemal proteins in Eimeria necatrix are thoughtto be critical ligands determining host cell specificity at the time ofinvasion. OBJECTIVES: Isolation and purification of Eimeria necatrix oocysts from Khuzestan province of Iran was performed. AcDNA encoding microneme 5 (EnMIC5) protein was cloned and expressed asrecombinant protein before the evaluation of its immunogenicity by Westernblotting. METHODS: A primer pair was designed based on the publishednucleotide sequence of Eimeria necatrix LZ strain micronem5 gene. APartial cDNA sequence fragment of 758 bp coding for microneme 5 protein(EnMIC5) was amplified by semi- Nested RT-PCR. PCR products were cloned andexpressed in a Maltose Binding protein (MBP) containing expression vector(pMAL-c2x) in Escherichia coli. The cDNA which is encoded for 252 aminoacids shows high degree of conservation. It contains the adhesive plasmapre-kallikrein and seven hydrophilic motifs. RESULTS: The results of SDS-PAGErevealed that the recombinant protein with a molecular weight of 70 kDa wasover-expressed after induction with IPTG. Western blotting results revealedthat the expressed recombinant protein was reacted with sera of the chicksinfected with Eimeria necatrix. It was suggested that this proteinshould have a good immunogenicity and can be used for further studies. CONCLUSIONS: In conclusion, the high degree of sequence homology indicates that thisprotein is immunogenic and might be aninteresting vaccine target, and deserves further investigation |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
Eimeria necatrix, Gene Expression, immunogenicity, microneme |
|
| نویسندگان مقاله |
منصور میاحی |
faculty of veterinary medicine of ahvaz
عباس جلودار |
department of basic sciences, faculty of veterinary medicine, shahid chamran university, ahvaz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهید چمران (Shahid chamran university)
شهروز مسایلی |
he is working at veterinary department of qum state
حسین حمیدی نجات |
department of pathobiology, faculty of veterinary medicine, shahid chamran university, ahvaz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهید چمران (Shahid chamran university)
مسعود صیفی آباد شاپوری | seyfi abad shapouri
3department of pathobiology, faculty of veterinary medicine, shahid chamran university, ahvaz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهید چمران (Shahid chamran university)
نغمه موری بختیاری | moori bakhtiari
department of pathobiology, faculty of veterinary medicine, shahid chamran university, ahvaz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهید چمران (Shahid chamran university)
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://ijvm.ut.ac.ir/article_58677_9d39b619fb234eed44dc01914394dbc3.pdf |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
|
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|