|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی گیلان، جلد ۸، شماره ۳۱، صفحات ۱۴-۱۹
|
|
|
| عنوان فارسی |
تأثیر کاهش حجم مخلوط واکنشی و افزایش سرعت آمپلیفیکاسیون DNA بر روی حساسیت تکنیک واکنش زنجیره پلیمراز |
|
| چکیده فارسی مقاله |
چکیده در سالهای اخیر با وجود آنکه گزارش‌های رضایتبخش در بکارگیری PCR جهت تشخیص عفونتهای کلینیکی ارائه گردیده، معهدا این تکنیک هنوز نتوانسته بواسطه مشکلاتی نظیر هزینه بالا به آزمایشگاه تشخیصی راه پیدا نماید. معرفی PCR سریع در حجم‌اند و با استفاده از ترموسیکارهای مخصوص، سبب افزایش سرعت و کاهش میزان مواد مصرفی گردیده است. اما بکارگیری آن مستلزم برخورداری از دستگاهها و امکانات بخصوص بوده و در نتیجه نیازمند یک سرمایه گذاری اضافی برای آزمایشگاهها میباشد. در این مطالعه کاهش حجم مخلوط واکنشی با هدف افزایش سرعت و تقلیل هزینه مواد مصرفی با استفاده از ترموسیکلرهای معمولی و وسایل روتین آزمایشگاه مورد مطالعه قرار گرفت. در این بررسی DNA مایکوپلاسما پنومونیه پس از تحت تأثیر قرار گرفتن با پروتئیناز K، با روش فنل کلروفرم خالص گردید. آزمایش PCR در حجم‌های متفاوت و برنانه‌های گوناگون انجام پذیرفت و محصول بدست آمده با ژل آگارز الکتروفرز آنالیز گردید. نتایج حاصله در طی آزمایشات متعدد با حجم‌های متفاوت و برنامه‌های گوناگون لازم برای یک سیکل تکثیر تأیید نمود که حجم مخلوط واکنشی در لوله‌های معمولی آزمایش (ependorff) از ul 100 به ul 10 و همچنین زمان مورد نیاز از 5/6 دقیقه به 5/3 دقیقه برای هر سیکل تکثیر قابل کاهش بوده، بدون آنکه حساسیت تست کاسته گردد. در مرحله بعدی به منظور اطمینان از حساسیت شرایط جدید تست، روش مذکور با نمونه‌های کلینیکی که در حالت اصلی دارای نتیجه مثبت بودند مورد آزمایش قرار گرفت. کلیه نتایج حاصله نشان داد که تمامی نمونه‌های مثبت در حالت اصلی در حالت جدید نیز دارای نتایج مثبت بودند. انجام PCR در حجم‌های اندک، نه تنها سبب تقلیل هزینه انجام تست به میزان قابل توجهی میگردد بلکه میتواند سرعت انجام آمپلیفیکاسیون را به دو برابر افزایش دهد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
تشخیص / مایکوپلاسما پنومونیه / واکنش زنجیره پلیمرها |
|
| عنوان انگلیسی |
Effect of Lowering PCR Reaction Volumes and Increasing the Speed of DNA Amplification on the Sensitivity of PCR |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
ABSTRACT Recently, PCR is being reported more frequently with satisfactory results on the diagnosis of clinical infections. Widespread availability of PCR promises a sensitive and specific alternative, to traditional methods, but these benefits must be balanced against cost. Protocols using small volumes have described where the reaction taken place in capillary tubes, and small volumes work when specialized thermocycler used. Despite its benefits on increasing the speed and decreasing the cost, this technique needs special equipment and thermocycler to perform which may not be possible for most molecular diagnostic laboratories. In this study, we wanted to evaluate effects of reducing time and volumes of reagents and therefore increasing speed and lowering reagent costs by routine equipment and ordinary thermocycler. In this study, M. pneumoniae DNA was extracted by phenol Chloroform method after treating with proteinase K. PCR was performed in different volumes and various amplification, and PCR products were analyzed by gel agarose electrophoresis. Experiments performed with extracted M. pneumoniae DNA confirmed that volume of reaction mixture can be decreased from 100 to 10 ul. Obtained results also proved. amplification time can be decreased from 6.5 to 3.5 minute for each cycle without losing of the sensitivity. These finding indicate dropping of the cost up to one tenth and necessary amplification time to the half in comparison with conditions. In the next step 34 throat swabs were tested with both conditions. All specimens had same sensitivity for optimized and main conditions. Performing PCR in small volumes not only reduce the cost of the test, but also can remarkably increase speed of the DNA amplification. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
Diagnosis/ Mycoplasma Pneumoiae/ Polymerase Chain Reaction |
|
| نویسندگان مقاله |
دکتر مسعود حاجیا | M . Hajia
استادیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی همدان
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://journal.gums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-312&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/10/article-10-1394941.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
تخصصی |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|