|
|
، جلد ۱۹، شماره ۳، صفحات ۱-۱۰
|
|
|
| عنوان فارسی |
موتاسیون هدف‌مند، کلونینگ و بیان پروتئین استرپتوکیناز به منظور تولید مولکول جدید مناسب برای پگیلاسیون |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: استرپتوکیناز رایج‌ترین و در حال حاضر مقرون به صرفه‌ترین داروی فیبرینولیتیک برای درمان سکته‌های قلبی و گرفتگی رگ‌ها می‌باشد. علی‌رغم مزایا و برتری‌هایی که استرپتوکیناز نسبت به داروهای ترومبولیتیک دیگر دارد، تجویز آن می‌تواند با مشکلاتی از جمله تحریک سیستم ایمنی بدن و هموراژی همراه بوده و هم‌چنین نیمه عمر نسبتا پایین آن منجر به درمان ناقص شود. پگیلاسیون یکی از روش‌های رایج برای اصلاح برخی از این معایب می‌باشد. مواد و روش‌ها: در تحقیق حاضر برای طراحی و تولید پروتئینی مناسب برای پگیلاسیون اختصاصی با سیستئین، نرم افزار SPDBviewer استفاده شد. پس از انجام موتاسیون هدف‌مند به روش SOEing PCR، ژن موتانت (sk45cys) و غیرموتانت (ski) به درون وکتور pET26-b وارد شده و ساختارهای حاصل به درون اشرشیاکلی ترنسفرم شدند. کلون‌های حاصل پس از رشد توسط IPTG بیان شده و بیان پروتئین‌ها توسط SD-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی گردید. پروتئین‌ها با تکنیک افینیتی کروماتوگرافی با ستونNi-NTA تخلیص شدند و فعالیت آن‌ها با استفاده از روش کروموژنیک و از طریق سوبسترای S2251 بررسی شد. یافته‌ها: نتایج حاصل از فعالیت سنجی نشان داد که فعالیت آمیدولیتیک sk45cys در مقایسه با ski، پس از 30 دقیقه از تشکیل کمپلکس با پلاسمینوژن، 10 درصد افزایش فعالیت داشته است. نتیجه‌گیری: نتایج نشان دادند که با توجه به سطحی بودن مکان سیستئین جایگزین شده و هم‌چنین افزایش نسبی فعالیت SK45cys این پروتئین می‌تواند مولکول مناسبی برای انجام فرآیند پگیلاسیون اختصاصی باشد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
فعالیت سنجی، موتاسیون، پگیلاسیون، استرپتوکیناز |
|
| عنوان انگلیسی |
Site-Directed Mutation, Cloning and Expression of Streptokinase for Producing a New Suitable Molecule for PEGylation |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Streptokinase is one of the most common and cost effective fibrinolytic drugs for treatment of heart attacks and vein thrombosis. Unlike many advantages over other thrombolytic drugs, administration of streptokinase can produce some complications such as immunologic reactions, hemorrhage and incomplete treatment due to relative short half life. Pegylation is one of the most common methods for improving of these shortcomings. Materials and Methods: In this study, designing a proper candidate for specific pegylation with cysteine was done by means of SPDBviewer software. After a meaning ful mutation by SOEing PCR method, mutated (sk45cys) and intact SK (ski) genes were cloned in pET26-b vector and the structures were transformed in E.coli. Clones, Afrer growing, were expressed by IpTG and exptression of proteins was confirmed by SDS-PAGE and western blotting. The proteins were purified by affinity chromatography with NiNTA columns and amidolytic activity of purified proteins was assayed using chromogenic method and different concentrations of S2251 substrate. Results: Results of activity assays showed that amidolytic activity of SK45cys had about 10% increase in comparison to Ski, after 30 minutes of complex formation with plasminogen. Conclusion: Generally, it was concluded that, considering cys45 as a superficial aminoacid and also relative increase of activity, SK45cys can be considered a suitable protein for specific pegylation. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
Activity assay, Mutation, Pegylation, Streptokinase |
|
| نویسندگان مقاله |
سمیه باقری | Somayeh Bagheri
Department of Biology, Payame Noor University, Shahre Rey, Iran.
گروه زیست شناسی، دانشگاه پیام نور، شهر ری، ایران.
حسین مقصودی | Hossein Maghsoudi
Department of Biology, Payame Noor University, Shahre Rey, Iran.
گروه زیست شناسی، دانشگاه پیام نور، شهر ری، ایران.
فاطمه متولی | Fatemeh Motevalli
Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran.
، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.
فرحناز خوشدل نظامیها | Farahnaz Khoshdel Nezamiha
Research and Development Department, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran.
بخش تحقیق و توسعه، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران،کرج، ایران.
سید مهدی حسن زاده | Seyed Mehdi Hasanzadeh
Research and Ddevelopment Department, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran.
بخش تحقیق و توسعه، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران.
رضا عربی میانرودی | Reza Arabi Mianroodi
Research and Ddevelopment Department, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran.
بخش تحقیق و توسعه، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران.
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4051-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2048662.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|