|
|
، جلد ۱۸، شماره ۲، صفحات ۸۰-۸۹
|
|
|
| عنوان فارسی |
همسانه سازی ژن فیوژن پروتئین ویروس بیماری نیوکاسل در شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان در لاین سلولی حشره |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: ویروس بیماری نیوکاسل (New Castle disease Virus) از مهمترین عوامل بیماریزا در طیور است و واکسیناسیون همچنان به عنوان راهکاری مؤثر برای کنترل این بیماری مطرح است. فیوژن پروتئین (F) قرار گرفته روی سطح ویروس بیماری نیوکاسل، در بیماریزایی این ویروس نقش اساسی دارد و میتواند به تنهایی باعث القاء ایمنی محافظتی گردد. با این پیش زمینه، هدف ما، تولید یک سازه نوترکیب (کد کننده پروتئین F) از شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان آن در لاین سلولی حشره بود. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، ابتدا ژن کامل F از سویه غیر بیماریزای لاسوتا ویروس بیماری نیوکاسل، به منظور تولید رشته DNA مکمل (cDNA)، با تکنیک RT-PCR فراوان سازی گردید. محصول تکثیر، در وکتور کلونینگ A/T و سپس در پلاسمید دهنده pFastBac Dual همسانه سازی گردید. بعد از تأیید فرآیند کلونینگ با دو روش PCR و آنالیز هضم آنزیمی، صحت توالی با روش تعیین توالی تأیید شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژن F متعاقباً در سویه باکتریایی Bac10DH تولید و سازه فوق با یک پنل اختصاصی PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن F و پرایمرهای عمومی 13M مورد تأیید قرار گرفت. یافتهها: تحلیل تستهای تأییدی نشان داد که سازه نوترکیب بکمیدی- بیان کننده ژن پروتئین F با توالی و چارچوب صحیح- با موفقیت ساخته شده است. نتیجهگیری: محصول این سازه نوترکیب واجد ژن F علاوه بر کاربرد مستقل در القاء ایمنی محافظتی میتواند به همراه محصول دیگر باکیولوویروسهای نوترکیب- بیان کننده ژنهای HN و NP برای تولید ذره شبه ویروسی (virus-Like particle,VLP) ویروس فوق در لاین سلولی حشره- مورد استفاده قرار گیرد. |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
باکیولوویروس، فیوژن پروتئین، ویروس بیماری نیوکاسل |
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning of Fusion Protein Gene of Newcastle Disease Virus into a Baculovirus Derived Bacmid Shuttle Vector, in Order to Express it in Insect Cell Line |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Newcastle disease virus (NDV) is one of the major pathogens in poultry and vaccination is intended to control the disease, as an effective solution, yet. Fusion protein (F) on surface of NDV, has a fundamental role in virus pathogenicity and can induce protective immunity, alone. With this background, here our aim was to construct a baculovirus derived recombinant bacmid shuttle vector (encoding F-protein) in order to express it in insect cell line. Materials and Methods: In this experimental study, at first complete F gene from avirulent strain La Sota of NDV was amplified by RT-PCR to produce F cDNA. The amplicon was cloned into T/A cloning vector and afterwards into pFastBac Dual donor plasmid. After the verification of cloning process by two methods, PCR and enzymatic digestion analysis, the accuracy of F gene sequence was confirmed by sequencing. Finally, F-containing recombinant bacmid was subsequently generated in DH10Bac cell and the construct production was confirmed by a special PCR panel, using F specific primers and M13 universal primers. Results: Analysis of confirmatory tests showed that the recombinant bacmid, expressing of F-protein gene in correct sequence and framework, has been constructed successfully. Conclusion: The product of this F-containing recombinant bacmid, in addition to its independent application in the induction of protective immunity, can be used with the other individual recombinant baculoviruses, expressing HN and NP genes to produce NDV-VLPs in insect cell line. |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
Baculovirus, Fusion protein, Newcastle disease virus (NDV) |
|
| نویسندگان مقاله |
محمد صادق هاشم زاده | Mohammad Sadegh Hashemzadeh
Applied Virology Research Center, Baghiatallah Medical Sciences Institute, Baghiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
پژوهشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایران
محمد رضا شفاعتی | Mohammad Reza Shafaati
Department of Microbiology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damaghan, Iran
گروه میکروب شناسی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان، دامغان، ایران
روح الله درستکار | Ruhollah Dorostkar
Applied Virology Research Center, Baghiatallah Medical Sciences Institute, Baghiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
پژوهشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایران
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3170-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2048801.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|