، جلد ۱۶، شماره ۱۲، صفحات ۹۶-۱۰۹
عنوان فارسی همسانه سازی، امتزاج و بررسی بیان کاست ژنی ctB و N ترمینال ipaD در E. coli
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از عوامل اصلی بیماری اسهال در انسان بوده که علیه آن واکسن وجود ندارد. یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زای موجود در شیگلا، پروتئین IpaD است. همسانه سازیN ترمینال ژن ipaD به همراه ژن ctBکه دارای نقش ادجوانتی و حاملی می باشد به شکل یک واکسن نوترکیب می‌توان سبب تقویت پاسخ ایمنی مخاطی شود. مواد و روش ها: طراحی پرایمر برای ژن‌های ipaD و ctB بر مبنای طراحی انجام شده برای ساخت کاست ژنی، صورت گرفت. واکنش PCR برای تکثیر این قطعات انجام و هر یک از قطعات تکثیر شده درون pGEM-Teasy vector همسانه سازی شدند. هر دو وکتور توسط آنزیم های محدودالاثر Hind III و Xho I برش خورده و در نهایت ژن ipaD به ژن ctB ملحق گردید. در ادامه کاست ژنی ctB-ipaD و وکتور بیانی pET28a(+) توسط آنزیم های محدودالاثر SalI و HindIII برش خورده و کاست ctB-ipaD در وکتور بیانی زیر همسانه سازی و بررسی بیان کاست ژنی انجام گرفت. یافته ها: در این تحقیق، N ترمینال ژن ipaD به عنوان یک آنتی ژن کاندید واکسن ژنی به ناحیه C ترمینال ژنctB که دارای نقش ادجوانتی و حاملی می‌باشد، متصل گردید. ژن های ممزوجی ctB-ipaD در وکتور بیانی pET28a(+) توسط PCR و هضم به وسیله آنزیم‌های با اثر محدود تأیید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه‌گذاری وسترن تایید گردید. نتیجه گیری: با توجه به مطالعات گذشته و مشابه، ایجاد کاست ژنی ctB-ipaD و بررسی بیان آن، هدف مورد انتظار این تحقیق بود. امید می رود با بیان پروتئین این کاست ژنی و در صورت تولید آنتی بادی مناسب بتوان به کاندید واکسن علیه شیگلا دست یافت.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله واژه‌های کلیدی، ادجوانت، ctB، شیگلوز، ipaD، فیوژن، همسانه سازی.
عنوان انگلیسی Cloning, Fusion and Expression of CtB and N-Terminal IpaD Gene Cassette in E.coli
چکیده انگلیسی مقاله Background: Shigella dysenteriae one of the main causes of diarrhea in humans, but there is no vaccine against it. IpaD protein is one of the most important virulence factors in pathogenic shigella. The cloning N-terminal ipaD genes with ctB genes that have a role in adjuvant and carrier as recombinant vaccine can caused enhance the mucosal immune response. Materials and Methods: Designing primers for genes ctB and ipaD were carried out based on the construction of gene cassettes, respectively. PCR reactions were performed to amplify the fragments and amplified fragments were cloned into pGEM-Teasy vector. Both the vector cut by restriction enzymes HindIII and XhoI and ipaD gene to gene ctB finally were Fusion. The ctB-ipaD gene cassette and expression vector pET28a(+) cuted by SalI and HindIII restriction enzymes. The cloning ctB-ipaD cassette was performed in the expression vector and expression of gene cassettes. Results: In this study, the N-terminal ipaD as vaccine candidate antigen was genetically linked to the C terminal of ctB which has a carrier and adjuvant role. Fusing ctB-ipaD in the expression vector pET28a(+) is confirmed by sequencing, PCR and digested with restriction enzymes. The recombinant proteins produced is confirmed by SDS-PAGE and Western blot. Conclusion: According to previous and similar studies, product cassette ctB-ipaD and expression its was expected. Is hoped to protein expression of this gene cassette and the production of antibodies could be achieved the candidate vaccine against Shigella.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله حسین هنری | Hossien Honari
Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

مهدی غفرانی ایوری | Mahdi Ghofrani Ivari
Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

مجتبی سعادتی | Mojtaba Saadati
Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

محمد ابراهیم مینایی | Mohammad Ebrahim Minaei
Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2170-2&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2048941.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده علوم پایه
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی اصیل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات