|
|
، جلد ۱۵، شماره ۱۰، صفحات ۴۳-۵۳
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و بیان پروتئین نوترکیب VP۲ پارو ویروس سگی در دو سیستم باکتریایی و پروکاریوتی بدون سلول |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: اهمیت پروتئین VP2 پاروویروس سگی در اتصال به سلولهای سرطانی انسانی و کیتهای تشخیصی دامپزشکی سبب شده تا مطالعات گستردهای در زمینه تولید این پروتئین صورت گیرد. هدف از انجام این پژوهش کلونینگ و تایید بیان پروتئین پوششی VP2 پاروویروس سگی در سیستم پروکاریوتی و بهینه نمودن بیان پروتئین VP2 در سیستم منحصر به فرد پروکاریوتی بدون سلول میباشد. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، پلاسمید pET-21a VP2 با کلون کردن محصول PCR ژن VP2 پاروویروس سگی در پلاسمید بیانی pET-21a ساخته شد. توالی کلون شده ابتدا با روش کلونی PCR ارزیابی شده، سپس توسط هضم آنزیمی و توالی یابی مورد بررسی قرار گرفت. به منظور تولید پروتئین VP2 پلاسمید pET-21a VP2 در باکتری E.coli سویه روزتا Rosetta(DE3) منتقل و بیان این پروتئین توسط IPTG القاء گردید. پروتئین تولید شده در هر دو شرایط باکتریایی و بدون سلول توسط تکنیک SDS PAGE بررسی گردید و در نهایت به وسیله آنتی بادی منوکلونال علیه VP2 توسط تکنیک وسترن بلات ارزیابی گردید. یافتهها: کلونینگ صحیح ژن VP2 با هضم آنزیمی و تعیین توالی قطعه کلون شده به اثبات رسید. بیان پروتئین VP2 در دو سیستم باکتریایی و بدون سلول توسط SDS PAGE تایید شده و در نهایت پروتئین VP2 به وسیله وسترن بلات تایید گردید. نتیجهگیری: نتایج این تحقیق نشان داد، ژن VP2 در طی مراحل کلونینگ تکثیر شده و به خوبی در وکتور مورد نظر کلون گردیده است و بیان پروتئین در هر دو سیستم باکتریایی و بدون سلول به طور کامل مورد تایید قرار گرفته است. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
سیستم بدون سلول، بیان پروتئین سطحی، پاروویروس، ژن VP2 |
|
| عنوان انگلیسی |
Expression and cloning of recombinant VP2 protein of canine parvovirus in bacterial and cell-free prokaryotic systems |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: The importance of VP2 protein of canine parvovirus to bind to human cancer cells and to detect the virus in veterinary detection kits has motivated a lot of research on the production of this protein. In this project, a surface gene of canine parvovirus (VP2) was cloned and expressed in a prokaryotic vector system and its expression was optimized in a specific cell-free prokaryotic expression system. Materials and Methods: In this experimental study, plasmid pET-21aVP2 was constructed by cloning the PCR product of VP2 gene of canine parvovirus into the plasmid expression pET-21a vector. The best sequence was analyzed through PCR and it was followed by confirmation with sequencing and restriction digestion. To produce VP2 protein, plasmid pET-21aVP2 was transferred into Escherichia coli, Rosetta (DE3) strain, and the expression of this protein was induced by IPTG. The production of VP2 protein in both systems was evaluated using SDS PAGE technique. The expressed protein was checked with monoclonal antibody against VP2 protein by Western blotting technique. Results: Successful cloning of VP2 protein was confirmed by enzymatic digestion and sequencing. The expression of VP2 protein in bacterial and cell-free prokaryotic systems was verified by SDS PAGE and the specific band in Western blotting also confirmed the VP2 protein. Conclusion: The results of this study showed that VP2 gene was amplified in the cloning phases and it was successfully cloned in the expression vector. Protein expression was confirmed in both bacterial and cell-free prokaryotic systems. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
روح الله درستکار | Rohollah Dorostkar
Tarbiat Modares University
دانشگاه تربیت مدرس
طراوت بامداد | Taravat Bamdad
Tarbiat Modares University
دانشگاه تربیت مدرس
اسماعیل صابرفر | Esmail Saberfar
Baqiyatallah University of Medical Sciences
دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1841-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2049060.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|