|
|
، جلد ۱۵، شماره ۹، صفحات ۵۱-۶۰
|
|
|
| عنوان فارسی |
بیان نوترکیب و تخلیص ناحیه ۱ فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در Escherichia coli و تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آن در موش سوری |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: سیاهزخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس میباشد که آنتیژن حفاظتکننده و ناحیه یک فاکتور کشنده (LFD1) ایمونوژنهای قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شدهاند. هدف این مطالعه بیان و تخلیص LFD1 در باکتری Escherichia coli و تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آن در موش سوری میباشد. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، ژن LFD1 با جایگاههای برش آنزیمی BamHI و XhoI با واکنش PCR تکثیر و بعد از جداسازی، در وکتور بیانی pET28a(+) همسانهسازی گردید. به منظور بیان ژن، این وکتور به باکتریهای صلاحیتدار E.coli-BL21(DE3)PLysS تراریخت شد. بیان ژن LFD1 تحت القایIPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتیژن حاصل در چهار نوبت به موشهای سوری تزریق شد. آنتی‌بادی پلی‌کلونال تولید شده در سرم موشها اندازهگیری گردید. یافتهها: ژن LFD1 کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله PCR، هضم آنزیمی و توالییابی تأیید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکهگذاری وسترن تایید گردید. در نهایت آنتی‌بادی پلی‌کلونال تولید شده از سرم موش سوری جدا شده و به وسیله تست الایزا ارزیابی و تأیید گردید. نتیجهگیری: با توجه به بیان مناسب، تولید آسان این آنتیژن و تیتر آنتی‌بادی پلی‌کلونال تولید شده علیه آنتیژن LFD1 به دلیل ایمونوژنیسیته آن در موشهای سوری، میتوان آن را به عنوان کاندید واکسن علیه سیاهزخم در نظر گرفت. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
سیاهزخم، باسیلوس آنتراسیس، ایمونوژن، آنتی‌بادی پلی‌کلونال |
|
| عنوان انگلیسی |
Recombinant expression and purification of Bacillus anthracis lethal factor domain 1 in Escherichia coli and production of polyclonal antibody against it in mice |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Anthrax is a common disease among human and livestock which is caused by Bacillus anthracis. Bacillus anthracis has two strong immunogenic proteins: Protective antigen (PA) and lethal factor domain I (LFD1) that have always been considered as vaccine candidates against Bacillus anthracis. The aim of this study is to express and purify the lethal factor domain I (LFD1) in Escherichia coli and produce polyclonal antibody against it in mice. Materials and Methods: In this experimental study, LFD1 gene was amplified with BamH I and Xho I restriction site by PCR. After isolation, the gene was cloned to the expression vector pET28a (+). This vector was transformed to E. coli-BL21 (DE3) PLysSto to express LFD1 gene. The expression of LFD1 gene was induced by IPTG. After protein purification by affinity chromatography, the produced antigen was injected into mice for four times. Then the produced polyclonal antibody in mice serum was evaluated. Results: The cloned LFD1 gene in pET28a (+) vector was confirmed by PCR, enzymatic analysis, and sequencing. The expressed and purified recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. Finally, the isolated polyclonal antibody from mice serum was evaluated and confirmed by ELISA test. Conclusion: Noticing the appropriate expression, easy purification of LFD1, and the titer of produced polyclonal antibody against LFD1 in mice due to its immunogenicity, it can be considered as a good vaccine candidate against anthrax. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
Anthrax, Bacillus anthracis, immunogen, polyclonal antibody |
|
| نویسندگان مقاله |
مهدی رضائی | Mehdi Rezaee
ihu
دانشگاه جامع امام حسین(ع)
حسین هنری | Hosein Honari
ihu
دانشگاه جامع امام حسین(ع)
علی محمد زند | Ali mohammad Zand
ihu
دانشگاه جامع امام حسین(ع)
lمحمد علی عارف پور ترابی | Mohammad ali Arefpour torabi
ihu
دانشگاه جامع امام حسین(ع)
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1812-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2049073.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
عمومی |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|