|
|
، جلد ۱۵، شماره ۷، صفحات ۵۴-۶۲
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و بیان پروتئین نوترکیب فلاژلین FlaA ویبریو کلرا و بررسی خواص آنتی ژنیکی آن |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: ویبریو کلرا عامل بیماری کلرا در انسان میباشد. بیان فلاژل و تحرک باکتری در کلونیزاسیون و ویرولانس آن عامل بسیار مهمی است. ژن FlaA یکی از پنج ژن کد کننده فلاژلین میباشد که نقش اصلی در حرکت باکتری و کلونیزاسیون آن دارد و از نظر ایمنی بخشی نیز مورد توجه میباشد. در این مطالعه کلونینگ و بیان ژن FlaA در باکتری اشرشیاکلی و بیان پروتئین نوترکیب با روش وسترن بلات تائید میشود. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، ژن flaA با پرایمرهای اختصاصی با PCR تکثیر و با آنزیمهای BamHI و XhoI در وکتور pTZ57R/T کلون و در E.coli سویهDH5α تکثیر و تعیین توالی شد. در وکتور PGEX4T-1و در E.coli سویه BL21- DE3با القا IPTG بیان شد. از کیتG.S.T جهت خالص سازی پروتئین نوترکیب استفاده شد و پروتئین به موش تزریق و آنتی بادی اختصاصی سنتز شده در موش برای تایید نهایی پروتئین نوترکیب در وسترن بلات مورد استفاده گرفت. یافتهها: تعیین توالی نشان داد که ژن فوق بدرستی تکثیر شده است و آنتی بادی استفاده شده در وسترن بلات، تولید پروتئین نو ترکیب را نشان داد. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب flaA در میزبان E.coli با مقدار مناسب بیان گردید. تزریق پروتئین تولید شده به موش نشان داد که این پروتئین ضمن داشتن خاصیت آنتی ژنی به خوبی آن را حفظ میکند. بنابراین میتوان از آن به عنوان یکی از اجزا موثر در طراحی یک واکسن ایمنی بخش و نیز به عنوان یک ابزار تشخیصی استفاد نمود. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
اشرشیاکلی، فلاژلین، بیان ژن، پروتئین نوترکیب، ویبریو کلره |
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning and expression of the Vibrio cholera recombinant FlaA Flagellin protein and evaluation of its antigenicity characteristics |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Vibrio cholera is an important agent causing cholera in human. The expression of Flagellum and the movement of the bacterium are critical in the colonization and virulence of Vibrio cholera. FlaA gene is one the five genes encoding Flagellin which plays an important role in the activity and movement of the bacterium and its colonization which has a significant role in its immunogenicity. The aim of this study was to express and produce the recombinant FlaA protein in E.coli using Western blot method. Materials and Methods: In this experimental study, FlaA gene was proliferated by PCR method using the specific primers and cloned with BamHI and Xhol in pTz57R/T. Then it was proliferated and sequenced in DH5a vector of E.coli. The cloned FlaA gene was inserted into pGEX-4T-1 vector. The cloned vector was transformed to BL21-DE3 of E. coli and successfully expressed by induction of IPTG. The expressed protein was purified by GST affinity resin. For preparation of the primary antibody, the purified recombinant protein was injected to rats. Western blot assay method was used for determining the antigenicity of the recombinant FlaA. Results: Determination of gene sequencing showed that this gene has been proliferated properly and the antibody used in Western blot verified the production of the recombinant protein. Conclusion: The results of this study demonstrate that FlaA protein is immunogenic and can be evaluated in vaccine designing and as a diagnostic tool for detection of cholera infection. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
حمید کاظمیان | Hamid Kazemian
Department of Medical Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, Arak
دانشگاه علوم پزشکی اراک
محمد نجفی مصلح | Mohammad Najafi-Mosleh
department of microbiology, faculty of medicine, Hamadan university of medical science
دانشگاه علوم پزشکی همدان
حمید ابطحی | Hamid Abtahi
Department of Medical Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, Arak
دانشگاه علوم پزشکی اراک
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1466-1&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2049098.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی اصیل |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|