|
|
، جلد ۱۴، شماره ۲، صفحات ۷۲-۸۰
|
|
|
| عنوان فارسی |
بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نو ترکیب هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژنز بیان شده در باکتری اشریشیا کلی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: هیالورونیداز A از جمله پروتئینهای ترشحی استرپتوکوک پیوژن بوده که دارای قدرت آنتی ژنیک میباشد. امروزه با ردیابی آنتی بادیهای ضد این پروتئین روند عفونت ناشی از این باکتری پیگیری میشود. در این تحقیق سعی گردیده تا تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A در باکتری اشریشیا کلی انجام گیرد. مواد و روش ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاصی و استفاده از روش PCR، ژن هیالورونیداز A از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن فوق در ناقل پلاسمیدی pET32a جهت بیان کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pET32a -hylA وارد باکتری اشریشیا کلی سویه BL21- DE3-plySs شد. تولید پروتئین با القاء توسط IPTG صورت گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از کیت Ni-NTA خالص و میزان پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام شد. یافته ها: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط روش PCR با ژن هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژن یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A با القاء پلاسمید pET32a -hylA توسطIPTG انجام گردید. تخلیص پروتئین با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت Ni-NTA صورت گرفت. میزان پروتئین خالص شده برابر 500 میکروگرم در میلی لیتر به دست آمد. سرم موش واجد آنتی هیالورونیداز A در روش وسترن بلات با پروتئین تولید شده واکنش داد. نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A در میزبان اشریشیا کلی نیز امکان پذیر است. پروتئین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ میکند. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
، استرپوکوک پیوژن، اشریشیا کلی، بیان ژن، ژن هیالورونیداز A |
|
| عنوان انگلیسی |
Antigenic characteristics of recombinant hyaluronidase A of Streptococcus pyogenes expressed in E. coli |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Hyaluronidase A is an antigenic protein that is secreted by Streptococcus pyogenes. Nowadays, streptococcal infections are diagnosed by tracking down anti-hyaluronidase A antibodies. In this study, the attempt was made to generate recombinant hyaluronidase A in E. coli. Materials and Methods: In this experimental study, through designing specific primers and polymerase chain reaction (PCR), hyaluronidase A gene was amplified and after purification, it was sub-cloned in plasmid expression vector pET32a. Then pET32a-hylA was transferred to E. coli BL21-DE3-plySs. Protein generation induced by IPTG. The recombinant protein was purified by Ni-NTA kit and its concentration was assayed by Bradford method. Western-Blot analysis was run for verifying the recombinant hyaluronidase A. Results: The nucleotide sequencing of the gene amplified by PCR was the same as hyaluronidase A gene from Streptococcus pyogenes. Production of the recombinant hyaluronidase A via induction by pET32a-hylA plasmid was done through IPTG. The expressed protein was purified by affinity chromatography by Ni-NTA resin. The concentration of purified protein was 500µg/ml. analysis using a mouse anti-hyaluronidase A serum was reacted with the generated protein using Western-Blot analysis. Conclusion: Recombinant HylA protein can be generated in E.coli and the resulting protein maintains its antigenic properties desirably. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
آذر مرادخانی | Azar Moradkhani
ARAK AZAD University
دانشگاه آزاد اراک
حمید ابطحی | Hamid Abtahi
Arak University of Medical Sciences
دانشگاه علوم پزشکی اراک
ایرج پاکزاد | iraj pakzad
Ilam Medical Sciences Universiyy
دانشگاه علوم پزشکی ایلام
مسعوده کریمی | Masode Karimi
Arak University of Medical Sciences
دانشگاه علوم پزشکی اراک
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-33-5&slc_lang=fa&sid=1 |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/2736/article-2736-2049252.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
علوم پایه |
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|