، جلد ۱۵، شماره ۳، صفحات ۲۹۳-۳۰۱
عنوان فارسی مقایسۀ کمی و کیفی روش‌های CTAB و SDS برای تخلیص DNA از گیاه دارویی ماریتیغال (Silybum marianum L.)
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: معمولاً کیفیت DNA با عوامل مختلفی از جمله: عدم آلودگی ناشی از RNA، پروتئین، لیپید و سایر ساختارهایی که برای آنزیم تک پلیمراز (Taq Polymerase) در واکنش زنجیره­ای پلیمراز (PCR) و آنزیم­های برشی مزاحم، سنجیده می­شود. وجود ترکیبات فنلی و ترکیبات ثانویۀ دیگر، استخراج DNA از بافت برگ گیاه دارویی ماریتیغال (Silybum marianum L.) را جهت استفاده در مطالعات ژنتیکی و بیوتکنولوژی مشکل ساخته است. روش­ بررسی: در این مطالعه دو روش استخراج DNA جهت استخراج از بافت برگ 11 تودۀ ماریتیغال مورد مقایسه قرار گرفت. روش نخست بر اساس روش SDS انجام شد و در روش دوم از دستورالعمل CTAB با انجام تغییراتی استفاده گردید. کمیت DNA استخراج شده با تعیین میزان جذب هر یک از نمونه­ها در طول موج های260 و 280 نانومتر به­وسیلۀ دستگاه اسپکتروفتومتر مشخص گردید. در این پژوهش کیفیت DNA از نظر وجود شکستگی و مقدار RNA استخراج شده به­وسیلۀ الکتروفورز با ژل آگارز ارزیابی شد. یافته­ها: در میان روش­های به­کار گرفته شده جهت استخراج DNA از بافت برگ جمعیت­های ماریتیغال، روش CTAB از نظر کمیت و کیفیت DNA استخراج شده کارآیی پایینی داشت، در حالی­که روش SDS کارآیی مناسبی از نظر کمیت، کیفیت و خلوص DNA استخراج شده نشان داد. نتیجه­گیری: از آنجایی­که نسبت 280A/260A­ بیش از 2 نشان­دهنده وجود RNA و تخریب زیاد DNA و نسبت کمتر از 8/1 نشان­دهندۀ وجود آلودگی پروتئینی در DNA است، باید گفت که در مطالعات ژنتیکی و کارهای مهندسی ژنتیک روشی برای تخلیص DNA مناسب­تر است که DNA با کیفیت و کمیت بالاتری تولید کند. بسیاری از مطالعات انجام گرفته نشان می­دهد که در گیاهان دارویی و گیاهانی که حاوی مواد پلی­فنلی و پلی­ساکارید بالایی هستند به­کارگیری روش تخلیص CTAB و روش­هایی که از نظر تکنیکی نزدیک به این روش هستند کارایی مناسب­تری نشان می­دهند. CTAB به عنوان یک ماده شوینده می­تواند با DNA تشکیل کمپلکس دهد و آن را از کربوهیدرات­ها و پروتئین­ها جدا نماید. پلی­ساکارید­های باقیمانده نیز به­وسیلۀ NaCl غلیظ حذف می­گردند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله استخراج DNA، روش CTAB، روش SDS، گیاه دارویی ماریتیغال (.Silybum marianum L)، PCR،
عنوان انگلیسی Quantitative and Qualitative Comparison of CTAB and SDS Method for DNA Extraction from the Herb Milk Thistle (Silybum marianum L.)
چکیده انگلیسی مقاله Background and Objective: Quality of DNA is usually determined by multiple factors such as pollution especially caused by RNA, protein, lipid and other structures that inhibit Taq polymerase enzyme in polymerase chain reaction (PCR) and inhibit the cutting enzymes. The existence of phenolic compounds and other secondary metabolites has many effects on the quantity and quality of the purified DNA. At this investigation, in terms of quality and quantity with an efficient method for purification of DNA from S. marianum L. plant leaves, taking into account existing limitations to be provided. Subjects and Methods: In this study quantitative and qualitative comparison between two DNA extraction methods namely sodium dodecyl sulfate (SDS) and a modified cetyl trimethylammonium bromide (CTAB),were undertaken. The quantity of extracted DNA was determined by measurement of the absorption rate in wavelengths of 260 and 280 nm and their ratios by spectrophotometer. For investigate DNA quality the existence of RNA fracture was evaluated by agarose gel. Results: In terms of quantity and quality, for DNA extraction from S. marianum Populations, CTAB method had low performance While, SDS method showed appropriate performance in terms of quantity, quality and purity of extracted DNA. Conclusion: ANOVA of samples revealed that the purification method, races and their interaction is very significant and showed that the purification of the races and their interaction had an impact on the quality of purified DNA. The 280A/260A ratio that is more than 2 indicates the presence of RNA and DNA degradation. Also if this ratio is less than 1.8 Indicating the presence of protein contamination in DNA. In genetic engineering researches and genetic studies, the suitable methods for DNA purifying are those that get higher quantity and quality of net DNA. Many studies carried out on medicinal plants and plants which contain high level of polyphenol and polysaccharide compounds showed that CTAB method and other methods that are technically same to CTAB have better efficiency. CTAB as a detergent can form complex with the DNA and can separate it from carbohydrates and proteins. The remaining polysaccharides are removed by concentrated NaCl.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله استخراج DNA, روش CTAB, روش SDS, گیاه دارویی ماریتیغال (.Silybum marianum L), PCR
نویسندگان مقاله خلیل عالمی سعید |
استادیار گروه بیوتکنولوژی.استادیار گروه بیوتکنولوژی دانشگاه رامین خوزستان.

زهره هدایت‌منش |
دانش‌آموختۀ کارشناسی ژنتیک.دانش‌آموختۀ کارشناسی ژنتیک دانشکدۀ بهزیستی و توانبخشی خوزستان.

احمد حیدری |
دانشجوی دکترای تخصصی رشتۀ اصلاح نباتات- ژنتیک مولکولی.دانشجوی دکترای تخصصی رشتۀ اصلاح نباتات- ژنتیک مولکولی دانشگاه زنجان.

سید امیر حسینی |
دانشجوی دکتری تخصصی نانوبیوتکنولوژی مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع )، تهران، ایران

مسعود شمس‌بخش |
دانشیار گروه بیماری های گیاهی.دانشیار گروه بیماری های گیاهی، دانشگاه تربیت مدرس تهران.

نشانی اینترنتی https://jsmj.ajums.ac.ir/article_47075_f72e12bb5ee7497fca85975add29bbe7.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات