|
|
، جلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۳۲۵-۳۳۴
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و بیان ژن اینترفرون آلفاb۲ی انسانی در سیستم بیانی اشرشیاکلی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمینه و هدف: اینترفرون‌ها وسیله دفاعی بدن علیه ویروس‌ها هستند که به سرعت در بدن تولید شده، سلولهای اطراف را به تولید پروتئین‌هایی که تکثیر ویروس را مهار، یا پاسخ ایمنی و رشد سلولی را کنترل می‌کنند، تحریک می‌کنند. با توجه به اهمیت دارویی اینترفرون آلفا b2 انسانی در ایران و جهان، تولید این دارو در داخل کشور و از طریق بیوشیمیایی امکان‌پذیر اما بسیار مشکل می‌باشد. زیرا تولید این پروتئین توسط سلولهای سالم بسیار کم انجام می‌شود. هدف از این تحقیق، همسانه‌سازی (Cloning) و بیان ژن اینترفرون آلفا b2 انسانی در باکتری اشرشیاکلی در یک سیستم بیانی مناسب جهت امکان هدایت پروتئین تولید‌شده به فضای پریپلاسمی باکتری است. بیان در پریپلاسم، فضای عالی برای تشکیل پیوند‌های صحیح و پیچش صحیح ایجاد می‌کند. ناخالصی پروتئین و فعالیت پروتئازها در پریپلاسم کمتر از سیتوپلاسم است و تخریب و تجزیه پروتئین‌ها در پریپلاسم کمتر اتفاق می‌افتد. روش بررسی: ژن اینترفرون آلفاb2 پس از تکثیر با آغازگرهای اختصاصی در ناقل بیانی (+)pET-26b تحت کنترل پروموتور T7 و پپتید نشانه پریپلاسمی pelB و با استفاده از آنزیم‌های برشی NcoI و XhoI کلون گردید و به باکتری اشرشیاکلی سویه (DE3)BL21 منتقل گردید. همسانه‌سازی ژن اینترفرون آلفا در ناقل بیانی pET-26b(+) با استفاده از Colony PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی، تأیید شد. سپس بیان ژن اینترفرون آلفا با استفاده از آنالیز بلات نقطهای در فضای پریپلاسمی و بهصورت پروتئین کل در زمانهای مختلف پس از القاء با IPTG مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: با استفاده از آنالیز بلات نقطهای تأیید شد که پروتئین نوترکیب اینترفرون آلفاb2 در سیستم بیانی اشرشیاکلی تولید و وارد فضای پریپلاسمی باکتری شده است. نتیجهگیری: این تحقیق میتواند امکان تولید پروتئین مهم اینترفرون آلفاb2 انسانی نوترکیب را در شکل صحیح خود و با صرف هزینه‌های بسیار پائین‌تر فراهم آورد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
اینترفرون آلفاb2، (+)pET-26b، اشرشیاکلی، IPTG، |
|
| عنوان انگلیسی |
Production of Human Alpha 2b Interferon in E.coli Expression System |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background and Objective: Interferons are part of the body's defense system against viruses. These proteins are generated in the body, and then they trigger the cells around them to produce inhibitor proteins against virus replication. The purpose of this study was cloning and expression of the human interferon alpha-2b gene in preplasmic space of Escherichia coli. Subjects and Methods: In this research, Alpha 2b interferon gene was cloned in a pET-26b (+) expression vector, under the control of T7 promoter and pelB periplasmic signal peptide sequence using NcoI and XhoI restriction enzymes. The expression vector was transformed into Escherichia colistrain BL21 (DE3).Cloning of alpha interferon gene confirmed using colony PCR, digestion and DNA sequencing.Gene expression of alpha interferon was examined by SDS-PAGE and Dot blot analysis. Also the possibility of periplasmic targeting was determined using SDS-PAGE and dot blot analysis at 15 hrs after induction. Results: The results showed that Alpha 2b interferon was produced in bacterial expression system and targeted to periplasmic space. Conclusion: Our study showed that the production of pharmaceutical recombinant protein in preplasmic space of bacterial expression system is fissible and can be ustilized as a cheaper source and more efficient than conventional expression systems. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
اینترفرون آلفاb2, (+)pET-26b, اشرشیاکلی, IPTG |
|
| نویسندگان مقاله |
نهضت عبدالرسولی |
دانشکدۀ علوم کشاورزی، دانشگاه پیام نور کرج، ایران
حمید رجبی معماری |
دانشکدۀ علوم کشاورزی، دانشگاه پیام نور کرج، ایران.
محمد رعایایی اردکانی |
گروه زیست‌شناسی، دانشکدۀ علوم، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایران.
محمدعلی ابراهیمی |
گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه پیام نور تهران، ایران.
نازنین ابراهیمی |
دانشکدۀ علوم کشاورزی، دانشگاه پیام نور کرج، ایران.
|
|
| نشانی اینترنتی |
https://jsmj.ajums.ac.ir/article_49706_66d592d0448b70143e548c1a36f31af9.pdf |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
|
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|