|
|
Hormozgan Medical Journal، جلد ۲۰، شماره ۳، صفحات ۱۹۷-۲۰۴
|
|
|
| عنوان فارسی |
ساخت و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی ژن CD۲۰ انسانی با هدف ایمونوتراپی برای لنفومای غیر هوجکین |
|
| چکیده فارسی مقاله |
چکیده مقدمه: لنفومای غیرهاجکینی (NHL) سرطانی است که در لنفوسیت‌ها رخ می‌دهد. درمان اصلی NHL شیمی درمانی و پرتودرمانی می‌باشد. امروزه ایمونوتراپی یک روش درمانی امیدوارکننده در درمان انواعی از سرطان‌هاست که برخلاف روش‌های قبلی از اختصاصیت بالایی برخوردار است. اندازه بزرگ آنتی‌بادی‌‌ها مانع از نفوذ مؤثر آن‌ها در بافت توموری می‌شود. در حالی که نانوبادی‌ها به دلیل سایز کوچک شان وارد بافت و به اپی توپ‌ها متصل می‌شوند. CD20 یک پروتئین در سطح سلول‌های B می‌باشد. بیان بالای CD20 در لمفومای غیرهاجکینی و داشتن اپی توپ خارج سلولی تشخیص داده شده با آنتی بادی‌های مختلف این پروتئین را هدف مناسبی برای ایمونوتراپی با آنتی‌بادی مونوکلونال ساخته است. هدف از این مطالعه، طراحی و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی لوپ خارج سلولی CD20 انسانی، ناحیه لولا و Fc ایمونوگلوبین شتر می‌باشد. نویسنده مسئول: دکتر مجتبی طهمورث‌پور دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد مشهد - ایران تلفن: 9151159911 98+ پست الکترونیکی: m_tahmoorespur@yahoo.com روش کار: در این مطالعه، ما قطعه‌ای شامل لوپ خارج سلولی CD20 انسانی و نواحی لولا و Fc ایمونوگلوبین G شتری را ساختیم. سپس دو ناحیه برشی آنزیم‌های محدودالاثر HindIII و Xho1 و 6 اسید آمینه هیستیدین جهت خالص سازی به قطعه اضافه شد. کدون پایان در انتهای توالی قرار گرفت. توالی کد کننده‌ی مهندسی شده توسط شرکت Genray چین سنتز و برای دست‌یابی به وکتور بیانی نوترکیب درون وکتور بیانی pcDNA3.1+ الحاق گردید. جهت تأیید واکنش لیگاسیون، Colony PCR، توالی یابی و هضم انجام شد. نتایج: نتایج کلونی PCR، یک قطعه به طول 1132 kb را نشان داد. همچنین تعیین توالی و هضم صحت واکنش الحاق را تأیید کرد. نتیجه‌گیری: ما به یک pcDNA3.1+ نوترکیب حاوی ژن hCD20 به عنوان یک ناقل بیانی کارآمد در بیان پـروتئین نوترکیـب در سلول پستاندار دست یافتیم که می‌تواند جهت تولید آنتی بادی مونوکلونال علیه CD20 انسانی استفاده شود. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Construction and cloning of a recombinant expression vector containing human Cd20 Gene for antibody therapy in Non-Hodgkin Lymphoma |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
ABSTRACT Introduction: Non-Hodgkin lymphoma (NHL) is a cancer that starts in lymphocytes. The main treatment for NHL is chemotherapy and radiation. Today immunotherapy is a promising therapeutic approach in the treatment of a variety cancers which is high specific unlike previous methods. Antibodies do not penetrate effectively into tumore tissues because of their large size. Whereas the small size of nanobodies (Camelid single-domain antibodies) allow them to efficiently enter into tissues and bind to the epitopes. Human CD20 over expression in the B-cell lymphoma makes this antigen as a validated target for immunotherapy. One major problem in production of full length CD20 is aggregation and misfolding. Therefore, production of a polypeptide is easer and favorable comparing to that of a full length transmembrane protein CD20. Correspondence: Mojtaba Tahmoorespur, PhD. Department of Animal Science, Ferdowsi University of Mashhad. Mashhad, Iran Tel:+98 9151159911 Email: m_tahmoorespur@yahoo.com Methods: The fragment consisting of human CD20 extra membrane loop and hinge and Fc of camelid IgG was constructed. Then it was facilitated by HindIII and XhoI restriction enzyme sites and fused to the 6× His tag for purifiction. The stop codon was engineered in the terminal sequence. The engineered coding sequence was synthesized by Generay Company and then inserted into the pcDNA3.1 (+) vector to obtain recombinant expression vector. The accuracy of ligation reaction was confirmed by colony PCR, sequencing and digestion. Results: The colony PCR result showed 1132 kb fragment. The results of digestion and sequencing showed that the protein was what we had hoped to acquire. Conclusion: We have obtained the recombinant expression vector inorder to express in mammalian cell which can be used to produce novel anti-human CD20 monoclonal antibody in future. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
سیده آرزو حسین | seyedeh arezou hosein
مجتبی طهمورث پور | mojtaba tahmoures pour
محمد هادی سخاوتی | mohamad hadi sekhavati
محمدرضا نصیری | mohamad reza nasiri
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://hmj.hums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-6&slc_lang=fa&sid=en |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/12/article-12-311094.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
|
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|